8.B（A）04血型鉴定1例
一、简要病史
患者，男性，54岁，因“右侧腰腹部疼痛3天”住院治疗，常规ABO血型鉴定时发现正反定型不一致。既往无输血史，无家族遗传性疾病史。
二、实验室检查
（一）血型血清学常规检查
1.血型鉴定
ABO正反定型不一致，RhD阳性，结果见表1-13。
2.抗体筛查
阴性。
（二）血型血清学特殊检查
1.红细胞H抗原检测
与抗-H凝集反应（2+）强于正常B型细胞（±）。
2.唾液血型物质
检测出B和H抗原物质，而无A物质。
血清学结果见表1-13：推测可能为B（A）。
表1-13 患者血型血清学鉴定结果
（三）血型分子生物学检测
1.ABO血型PCR-SSP分析
患者标本用ABO、cisAB与B（A）检测试剂盒进行PCR-SSP检测，结果见图1-12。
图1-12 患者ABO、cisAB与B（A）血型基因扩增电泳图谱
注：图A 1-8分别为：O1阳性，非O1阳性，O2阴性，非O2阳性，B阳性，非B阳性，A2阴性，非A2阳性，ABO基因检测结果均是O1B；而在图B第7、10、11泳道［B（A）04型特征带］均出现目的条带，其余泳道均为阴性，符合B（A）04表现。
2.ABO基因直接测序
第6、7外显子区域都存在261G/del、297A/G、526C/ G、640 A /G、657 C/T、703 A/G、796 A/C、803 C/G、930 A/G的杂合。参照ISBT红细胞免疫遗传学和血型术语予以ABO等位基因的命名，按惯例以ABO*A1.01等位基因标准序列为参考序列，发现该先证者在ABO*B.01基础上的c.640A>G突变是B（A）04型的等位基因（图1-13）［1-2］。
3.ABO基因克隆测序分析
对样本进行DNA克隆，挑取多个克隆进行序列测定，均发现2种单倍型的核苷酸序列。参照ISBT红细胞免疫遗传学和血型术语予以ABO等位基因的命名，按惯例以ABO*A1.01等位基因标准序列为参考序列。患者有1条单倍型序列是正常的ABO*O.01.01等位基因（c.261delG）；另1条单倍型的第7外显子测序结果序列为297G、526G、640G、657T、703A、796A、803C、930A，其与ABO*B.01等位基因的差别只在于第7外显子c.640A>G突变，而与B（A）04的等位基因序列一致。
分子生物学结论：该患者ABO血型基因型为ABO*BA.04/O.01.01。
三、诊疗经过
患者入院诊断为十二指肠球部溃疡穿孔，入院后第2天，行胃十二指肠溃疡穿孔修补术。因血液中心同时段发现了1例B（A）04健康献血者，遂为患者术中输注该献血者红细胞悬液2U。手术过程顺利，术后第10天，患者康复出院。
图1-13 ABO基因nt640多态性基因型克隆前后测序结果与ABO*B0.1等位基因序列比对
四、相关知识链接
按照ABO三复等位基因学说和孟德尔学说，血清学AB型和O型的亲代不可能生育出AB型或O型的子代，但B（A）型的亲代却是例外，是传统遗传学的特例。从血型血清学表现上看，B（A）血型红细胞上含有少量A抗原活性和接近正常的B抗原特异性，与人源血清鉴定结果为B型，与单克隆株抗-A试剂可出现阳性反应，强度较弱（<2+），亲和力较差，凝集块很快消散；其H抗原含量接近O型细胞，明显高于正常B型细胞；B（A）型血清中含有的抗-A可以凝集A1细胞和部分A2细胞，而不像通常AxB亚型血清中的不规则抗-A1只与A1细胞反应，不与A2细胞反应［3］。
五、案例点评
本研究通过ABO基因直接测序和克隆测序结果相互验证，排除碱基假突变，与B.01等位基因序列相比，突变均为c.640A>G，其余碱基序列完全一致，但二者各有1条单倍型序列是正常的O.01.01等位基因（c.261delG），符合ABO*BA.04/O.01.01的基因。该c.640A>G突变使214位甲硫氨酸被缬氨酸置换（p.Met214Val），从而导致该B等位基因具有编码双功能活性酶的能力。
本案例患者比较幸运，血液中心同时段有B（A）型血液可供输注，但这种概率非常小，通常可以选择B型或O型洗涤红细胞，紧急情况下可以选择B型悬浮红细胞。如果患者存在凝血功能障碍，通常选择AB型血浆、血小板输注。紧急情况下或AB型血浆、血小板无法获得时，也可以考虑输注B型血浆、血小板。
参考文献
1.林风秋，章旭，李剑平.α-1，3半乳糖基转移酶基因905A>G突变的研究［J］.中华医学遗传学杂志，2014，31（1）：82-84.
2.李丽春，章旭，李剑平.罕见B（A）血型的鉴定及临床安全输血的研究［J］.中国输血杂志，2016，25（7）：689-692.
3.黄晓燕，段福才，李大元，等.1例罕见B（A）血型者家系遗传调查及临床输血策略［J］.甘肃医药，2014，33（4）：295-299.