12.cisAB06亚型鉴定1例
一、简要病史
患者，女性，35岁，因“幽门梗阻拟行手术治疗”入院，术前备血时发现ABO血型正反定型不一致。既往有妊娠史，无输血史，否认家族遗传性疾病史。
二、实验室检查
（一）血型血清学常规检查
1.血型鉴定
抗-A弱凝集，ABO正反定型不一致，RhD阳性，结果见表1-19。
2.抗体筛查
阴性。
（二）血型血清学特殊检查
1.DAT
阴性。
2.唾液血型物质检测
唾液中无A物质，有B、H物质，结果见表1-19。
表1-19 患者血型鉴定结果
（三）血型分子生物学检测
1.ABO血型基因PCR-SSP分型检测
ABO血型基因分型电泳见图1-21，初步判断患者ABO基因型为B/O02型。
2.ABO基因第6～7外显子测序
参照ISBT红细胞免疫遗传学和血型术语予以ABO等位基因的命名，按惯例以ABO*A1.01等位基因标准序列为参考序列比对，存在6个碱基突变，分别是c.297A>G、c.657C>T、c.703G>A、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A突变。而与ABO*B.01基因序列比对仅在526位发生G>C的突变（c.526G>C），见图1-22。该位点的突变导致176位亮氨酸变成脯氨酸（p.R176G），其氨基酸与A基因相同。而此序列与ABO*cisAB.06基因的序列完全一致。该基因与各个cisAB基因突变点比较，见表1-20［1］。
图1-21 患者ABO血型基因分型电泳图
注：1～8：分别为O1、非O1、O2、非O2、B、非B、A2和非A2；M：1000bp分子量标志物。
图1-22 A101、B101和cisAB06等位基因的第7外显子部分测序结果
注：A：A101等位基因；B：B101等位基因；C：cisAB06等位基因。箭头示526位碱基突变点。
表1-20 cisAB基因的第6和7外显子突变位点
分子生物学检测结论：该样本基因型应为ABO*cisAB.06/O.01.02。
三、诊疗经过
患者入院后第4天在全麻下行胃大部切除术，术中输注O型洗涤红细胞2U，未发生输血不良反应，手术过程顺利。术后给予对症支持治疗，住院15天后康复出院。
四、相关知识链接
ABO血型系统基因定位于9号染色体，由7个外显子和6个内含子组成，包含编码序列1 062个碱基。ABO*A1.01和ABO*B.01两个等位基因高度同源，二者在氨基酸编码区仅有7个核苷酸的差异，其中c.297A>G、c.657C>T和c.930G>A均位于密码子的摇摆位置，不引起氨基酸的改变；c.526G>C（p.R176G）、c.703G>A（p.G235S）、c.796C>A（p.I266M）和c.803G>C（p.G268A）突变引起4个氨基酸的替换，从而使得酶特异性发生显著变化［2］。cisAB基因和B（A）基因就是在常见的A或B基因中发生1个或者2个碱基突变，使得A抗原有了一些B抗原的性质，或者B抗原有了一些A抗原的性质。
目前发现的cisAB的等位基因有7种，分别为在欧美发现的ABO*cisAB.01、ABO*cis-AB.02和ABO*cisAB.03等位基因，在中国台湾发现的ABO*cis-AB.04等位基因和在中国大陆发现的ABO*cis-AB.01var、ABO*cis-AB.05和ABO*cis-AB.06等位基因［2-4］。中国人ABO*cisAB.06等位基因是2009年Zhu等首先报道，推测ABO*cis-AB.06等位基因应该在中国人群中较罕见［3］。
cisAB表现型是一种独特的ABO表型，表现在同一等位基因的编码产物兼具A和B特异的糖基转移酶活性。cisAB血清学特征随着个体的不同、家系的不同而有所不同。cisAB06等位基因是在ABO*B.01等位基因的基础上保留了ABO*A1.01等位基因的526位C位点，相应的氨基酸组合为（176R、235S、266M和268A），即为ABBB单倍型组合的等位基因，与所发现的其他6种cisAB基因单倍型不同。Seto［5］等通过构建基因突变体和原核细胞体外表达的方式，分别研究了AAAA、BAAA、BBAA、BBBA和BBBB 5种单倍型组合的糖基转移酶特异性和酶动力学，发现BAAA、BBAA和BBBA单倍型组合均同时拥有A型酶供体和B型酶供体催化功能。我们推测ABBB单倍型组合能够同时催化A型酶供体和B型酶供体，血清学表达A和B抗原。
五、案例点评
本案例患者ABO血清学正反定型不一致，进行了SSP基因分型检测，最终通过ABO基因第6、7外显子测序，其序列与ISBT发布的ABO*cisAB.06基因的第6、7外显子序列完全一致。由于样本有限，未对该样本A和B转移酶活性进行检测。但是通过血清学试验我们推测本例cisAB06的ABBB型重组酶催化A型酶活性比正常A型酶低很多，因此A抗原表达非常弱，出现类似于B（A）的血清学表现。我们根据文献扩增引物对E67-F和E67-R扩增内含子5-3’非翻译区基因片段，引物针对A和B基因特异性设计，测序是1条单链结果，通过直接测序得cisAB06基因序列，结合PCR-SSP分型检测结果，判定该患者ABO基因型为ABO*cisAB.06/O.01.02［6］。
cisAB06患者与其他cisAB患者输血原则一致，通常选择O型洗涤红细胞，紧急时可以考虑输注O型悬浮红细胞，如果患者没有抗-B，也可以考虑输注B型悬浮红细胞。凝血功能障碍时，通常输注AB型血浆和血小板。
参考文献
1. PAMAIK S K, HELMBERG W, BLUMENFELD O O. BGMUT: NCBI dbRBC database of allelic variations of genes encoding antigens of blood group systems［J］. Nucleic Acids Res, 2012, 40: 1023-1029.
2. YAMAMOTO F, MENEILL F D, KOMINATO Y, et al. Molecular genetic analysis of the ABO blood group system cis-AB alleles［J］. Vox sang, 1993, 64(2): 120-123.
3. ZHU F, TAO S, XU X, et al. Distribution of ABO blood group allele and identification of three novel alleles in the Chinese Han population［J］. Vox sang, 2010, 98(4): 554-559.
4. TZENG C H, CHEN Y J, LYOU J V, et al. A novel cis-AB allele derived from aunique 796C>A mutation in exon 7 of ABO gene［J］. Transfusion, 2005, 45(1): 50-55.
5. SETO N O, PALCIC M M, COMPSTON C A, et al. Sequential interchange of four amino acids from blood group B to blood group A glycosyltransferase boosts catalytic activity and progressively modifies substrate recognition in human recombinant enzymes［J］. J Biol Chem, 1997, 272(22): 14133-14138.
6.戚新，章旭，刘显智，等.一例ABO血型cisAB06亚型的基因序列分析［J］.中华医学遗传学杂志，2013，30（2）：172-175.