工作任务

任务　植物组织培养实验室规划设计与预算

一、工作目标

掌握如何组建植物组织培养实验室；掌握组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具的使用方法和注意事项。能够独立完成植物组织培养实验室的设计；能够对组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具进行正确的使用。

二、场所及材料用具

组织培养实训室、超净工作台、高压灭菌锅、人工气候箱、冰箱、天平、培养箱、接种器具、玻璃器具、各种培养瓶。

三、工作过程

（一）植物组织培养实验室的规划设计

指导老师先讲解组织培养实验室各组成部分（准备室、缓冲室、无菌操作室、培养室、驯化室、温室）及使用功能，然后讲解实验室生产安全守则及有关注意事项。

（1）准备室（化学实验室）　主要用于蒸馏水的制备，以及生理、生化分析；器皿洗涤；培养基制备、分装、高压灭菌；植物材料的预处理和试管苗的出瓶、清洗与整理工作。

（2）缓冲室　在此室内换上经过灭菌的卫生服、拖鞋、戴上口罩，防止杂菌带入无菌操作室。此室安装有紫外灯、照明灯等。

（3）无菌操作室（无菌接种室）　主要用于材料的灭菌接种；无菌材料的继代和丛生苗的增殖或切割嫩茎插枝生根。主要仪器设备有超净工作台、空调、接种工具、器械支架。

（4）培养室　主要用于组培苗的培养。主要仪器有空调、除湿机、各类显微镜、温湿度计。

（5）驯化室　主要用于试管苗的驯化。

（6）温室　主要用于试管苗移栽后的管理，要求清洁无菌，配有光温调节装置、通风口等。用于试管苗不分季节的常年生产。

（二）植物组织培养实验室的主要仪器设备的使用

（1）分注器　用于分注培养基。

（2）移液枪　用于配制培养基时添加各种母液及吸取定量植物生长调节剂时使用。

（3）过滤灭菌器　用于加热易分解、丧失活性的生化试剂的灭菌。

（4）电炉等加热工具　用于配制培养基时加热溶解琼脂用。

（5）酸度计　用于测量和调整培养基的pH值。

（6）天平　称量化学试剂。

（7）磁力搅拌器　搅拌、溶解化学试剂。

（8）高温高压灭菌器　主要用于湿热灭菌。

（9）烘箱　干热灭菌（160～180℃/1～3h）、烘干组织（80℃）、迅速干燥洗涤后的玻璃器皿（80～100℃）。

（10）冰箱　储存培养基母液、生化试剂及低温处理材料时使用。

（11）摇床或转床　用于进行细胞悬浮培养或液体悬浮培养。

（12）显微镜　用于观察和解剖。

（三）植物组织培养实验室的主要器具的使用

1．培养基配制用具

（1）烧杯　用来盛放、溶解化学药品。

（2）容量瓶　用来配制标准溶液。

（3）量筒　用来量取一定体积的液体。

（4）刻度移液管　用来量取一定体积的液体。

（5）吸管　用来吸取液体，调节培养基的pH值及溶液定容时使用。

（6）玻璃棒　溶解化学药剂时搅拌用。

2．培养容器

（1）试管　适合少量培养基及试验各种不同配方时使用。

（2）三角瓶　适合各种培养。

（3）广口培养瓶　常用作试管苗大量繁殖用。

（4）培养皿　在无菌材料分离和细胞培养时使用。

（5）封口材料　棉花塞、铝箔、耐高温透明塑料纸、专用盖、蜡膜。

3．接种用具

（1）接种灯　用于金属接种工具的灭菌。

（2）手持喷雾器　盛装70%酒精，用于接种器材、外置提盒操作人员手部的表面灭菌。

（3）镊子尖头镊子

（4）解剖针、解剖刀等。

（5）剪刀　用于剪取外植体材料。

4．用具的洗涤

（1）玻璃器皿的洗涤　对于新购置的玻璃器皿（器壁上或多或少留有游离的碱性物质）使用前要先用1%的稀HCl浸泡一夜，再用肥皂水洗净，清水冲洗后，用蒸馏水再冲一遍，晾干备用；对于用过的玻璃器皿，用清水冲洗，再用蒸馏水冲洗一遍，干后备用；对于已被污染的玻璃器皿，先在121℃高压蒸汽条件下灭菌30min后，倒去残渣，用毛刷刷去器皿壁上的污染物，再用清水冲洗干净，蒸馏水淋洗一遍，晾干备用。

（2）金属用具的洗涤　对于新购置的金属用具（表面有一层油脂）要先擦净油脂后再用热肥皂水洗净，清水冲洗后，擦干备用；对于用过的金属用具用清水洗净，擦干备用。

5．用具的灭菌

参见表1-1。

四、考核内容与评分标准

1．相关知识

（1）组培实验室各个环节设施功能和设计原理（10分）。

（2）各个仪器设备的使用方法和注意事项（20分）。

（3）各个器具用品的规范使用方法。（20分）

2．操作技能

（1）设计组培实验室技能（20分）。

（2）掌握组培相关仪器设备的使用技能（10分）。

（3）熟练相关用具的使用、洗涤和灭菌技能（20分）。